(Проточна цитометрија, FCM) е клеточен анализатор што го мери интензитетот на флуоресценција на обоените клеточни маркери.Тоа е високотехнолошка технологија развиена врз основа на анализа и сортирање на единечни ќелии.Може брзо да ја мери и класифицира големината, внатрешната структура, ДНК, РНК, протеините, антигените и другите физички или хемиски својства на клетките и може да се заснова на збирката на овие класификации.
Проточен цитометар главно се состои од следните пет дела:
1 Проточна комора и систем за флуидност
2 Ласерски извор на светлина и систем за обликување на зракот
3 Оптички систем
4 Електроника, складирање, дисплеј и систем за анализа
5 Систем за сортирање на клетки
Меѓу нив, ласерското возбудување во ласерскиот извор на светлина и системот за формирање на зрак е главното мерење на флуоресцентните сигнали во цитометријата на проток.Интензитетот на светлината за возбудување и времето на експозиција се поврзани со интензитетот на флуоресцентниот сигнал.Ласерот е кохерентен извор на светлина што може да обезбеди осветлување со една бранова должина, висок интензитет и висока стабилност.Тоа е идеален извор на светлина за возбудување за да се исполнат овие барања.
Постојат две цилиндрични леќи помеѓу изворот на ласерот и комората за проток.Овие леќи го фокусираат ласерскиот зрак со кружен пресек испуштен од изворот на ласерот во елипсовиден зрак со помал пресек (22 μm × 66 μm).Ласерската енергија во овој елипсовиден зрак се дистрибуира според нормална дистрибуција, обезбедувајќи постојан интензитет на осветлување за клетките што минуваат низ областа за откривање ласер.Од друга страна, оптичкиот систем се состои од повеќе групи на леќи, дупки и филтри, кои грубо можат да се поделат во две групи: спротиводно и низводно од комората за проток.
Оптичкиот систем пред комората за проток се состои од леќа и дупка.Главната функција на леќата и дупката (обично две леќи и дупка) е да го фокусираат ласерскиот зрак со кружен пресек што го емитува ласерскиот извор во елипсовиден зрак со помал пресек.Ова ја дистрибуира ласерската енергија според нормална дистрибуција, обезбедувајќи постојан интензитет на осветлување за клетките низ областа за откривање на ласерот и минимизирање на пречките од залутаната светлина.
Постојат три главни типа на филтри:
1: Long pass filter (LPF) - дозволува да помине само светлина со бранови должини повисоки од одредена вредност.
2: Краткопропусен филтер (SPF) - дозволува да помине само светлина со бранова должина под одредена вредност.
3: Пропусен филтер (BPF) - дозволува светлината да помине само во одреден опсег на бранови должини.
Различни комбинации на филтри можат да насочат флуоресцентни сигнали на различни бранови должини до поединечни фотомултипликаторни цевки (PMTs).На пример, филтрите за откривање зелена флуоресценција (FITC) пред PMT се LPF550 и BPF525.Филтрите што се користат за откривање на портокалово-црвена флуоресценција (PE) пред PMT се LPF600 и BPF575.Филтрите за откривање црвена флуоресценција (CY5) пред PMT се LPF650 и BPF675.
Проточната цитометрија главно се користи за сортирање на клетките.Со напредокот на компјутерската технологија, развојот на имунологијата и пронаоѓањето на технологијата на моноклонални антитела, нејзините апликации во биологијата, медицината, фармацијата и други области стануваат сè пораспространети.Овие апликации вклучуваат анализа на динамиката на клетките, клеточна апоптоза, типизација на клетки, дијагноза на тумор, анализа на ефикасноста на лекот итн.
Време на објавување: 21-ти септември 2023 година
